Gela elektroforēze un tās izmantošana proteīnu izdalīšanā

Nedenaturējošās proteīnu gela elektroforēzes metodes.
Nedenaturējošajās proteīnu gela elektroforēzes metodēs proteīni tiek analizēti to natīvajās formās. Līdz ar to elektroforētiskais proteīnu kustīgums ir atkarīgs ne tikai no masas un lādiņa attiecības, bet arī no proteīna molekulas formas un izmēra. Šajā metodē bieži vien tiek pievienota krāsviela, piemēram, kumasī zilais, lai nedenaturētam proteīnam piešķirtu lādiņu un palielinātu elektroforētisko kustīgumu. Šādu metodi caur par Blue native PAGE. Var arī nepievienot nekādas krāsvielas, un veikt tā saucamo Clear native PAGE. Šajā gadījumā proteīnu elektroforētiskais kustīgums atkarīgs tikai no proteīna iekšmolekulārajiem lādiņiem.
Proteīnu gela elektroforēzē izmantotās bufersistēmas.
Tiek lietota viendabīgās (continuous) un neviendabīgās (discontinuous) bufersistēmas. Viendabīgajās bufersistēmās tiek lietota viena un tā pati buferšķīduma sastāvdaļa gan paraugā, gan virs gela, gan pie elektrodiem. Visur tiek nodrošināts konstants pH. Neviendabīgajās bufersistēmās ir vairāku buferšķīdumu sastāvdaļas un arī atšķirīgs pH dažādos punktos. Šādu neviendabīgu bufersistēmu priekšrocība ir tā, ka iespējams analizēt pat samērā atšķaidītus paraugus, bet iegūt labi atdalītas un neizplūdušas proteīnu joslas.
…