2. Materiāli un metodes
2.1. Izmantotais materiāls DNS iegūšanai
Populācija ‘Aizkraukle’ tika iegūta 2004. gada ekspedīcijā pie Aizkraukles baznīcas, ko veica Skrīveru Zemkopības zinātniskais institūts. Materiāls DNS izdalīšanai tika iegūts no lucernas populācijas ‘Aizkraukle’ lapu paraugiem, kas izaudzēti LU Aģentūras „LU Bioloģijas institūta” Augu ģenētikas laboratorijas siltumnīcā. DNS tika izdalīta 23 augiem, izmantojot svaigu lapu materiālu ar CTAB (acetil trimetil amino bromīds) izdalīšanas metodi ar merkaptoetanola koncentrāciju 2%.
Viena DNS parauga izdalīšanai tika ņemta viena lapiņa. Svaigais lapu materiāls tika ievākts tieši pirms DNS izdalīšanas.
2.2. Darbā izmantojamo instrumentu un materiālu sagatavošana
DNS izdalīšanai tika izmantoti sekojoši materiāli un aprīkojums: Eppendorf mikropipetes (ar 2-20 μl, 20-200 μl, 100-1000 μl diapazonu), Eppendorf 1,5 ml stobriņi, plastmasas nūjiņas, mikropipešu uzgaļi.
Izmantojamos materiālus autoklāvēja 1 atmosfēras spiedienā vismaz 20 min (4. attēls). Plastmasas nūjiņas pēc mazgāšanas apstrādā ar spirtu.
Izmantotie reaģenti CTAB metodei : CTAB buferis (0,1 M Tris, pH8,0, 0,0iM EDTA, 0,7 M NaCl, merkaptoetanols (2%), hloroforma izoamilalkahols (24:1), izopropanols, mazgāšanas buferis (76% etanols, 0,2 M nātrija acetāts), skalošanas šķīdums (76% etanols, 0,01 M amonija acetāts), TE buferis.
Izdalītās DNS kvalitātes noteikšanai ar elektroforēzi tika izmantota Erlenmeijera kolba, Eppendorf mikropipetes (ar 2-10 μl, 20-200 μl diapazonu), mikropipešu uzgaļi.
Izmantotie materiāli: 50x TAE buferis (uz 1 L ņem 242g Tris, 100mL 0.5M EDTA ar pH 8.0, 57.1 mL aukstas etiķskābes, HCl, lai pH būtu 7.6-7.8, ūdeni līdz 1000 mL atzīmei), no tā pagatavotais 1x TAE buferis, agaroze, etīdija bromīds, krāsviela 6xMass loading Gel Solution, DNS garuma marķieris (MassRuler™ DNA Ladder Mix).
Izmantojamos materiālus autoklāvēja 1 atmosfēras spiedienā vismaz 20 minūtes.
Visus darba etapus veic halātā un cimdos.
…
